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引物二聚体
[~梦醒了*]
发表于：2024-06-09 点击:60
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pcr扩增产生大量引物二聚体的原因?
如果没有杂带，只是目的条带不亮，就不是特异性问题，而是扩增效率较低。可能是引物结合不好，或者两个引物退火温度差异过大等原因。可以先试一试降低退火温度，增加循环数。提高模板浓度，或回收后再次扩增也可以试一试。如果要求不是很高，这样优化一下就差不多了。
pcr引物失效还能形成二聚体吗?
引物二聚体是引物的3'端间相互错配扩增形成的。 引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们 的肉眼看不到而已。 提高PCR严谨性(包括提高退火温度，降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。
两种引物不能碱基互补配对的原因?
原因是如果引物的碱基互补了，那么两种碱基会结合，形成一段小DNA链，就失效了。 引物是引起解旋的DNA与之配对，形成两条新的DNA链，从而达到DNA的复制 而且如果那样的话会形成引物二聚体，就是引物之间互为模板进行扩增，一方面会产生引物二聚体条带，对PCR检测产生影响；另一方面，引物的大量消耗，会降低对目的条带的扩增效率，甚至扩增失败，所以才需要在设计的时候尽量避免掉，两种引物互补会表现为在琼脂糖凝胶电泳上出现引物二聚体的条带，这个需要再设计引物的时候花功夫。
引物设计基本原理?
原理
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